زائر
تهدف تقنية P إلى تضخيم جزيئات قليلة من الحمض النووي DNA، بعد استخلاصه من خلايا أو سوائل الجسم وبالتالي الحصول على كميات كبيرة منه يمكن إجراء التحليل عليه. يمكن اعتبار تقنية P ترجمة مبسطة لعملية انتساخ الحمض النووي DNA أثناء الانقسام الخلوي.ولكي يتم هذا الانتساخ، لا بد من توفر مواد معينة تساعد على ذلك:
1-البادئات Pimes وهي عبارة عن نيوكلوتيدات قليلة( ignetides (18 – 20 أساس آزوتي قادرة على الارتباط مع الأسس الآزوتية للحمض النووي المراد تضخيمه، وذلك في منطقة ذات ترتيب مميز ونوعي غير متبدل للأسس الازوتية في الحمض النووي أو ما يعرف بمنطقة عالية الحفظ Highy nseved egin .
2- كميات وافرة من النيوكليوزيدات ثلاثية الفوسفات منقوصة الأوكسجين
(dATP,dTP,dGTP,dTTP)Dexyneside tiphsphates(dNTPs)
3-أنظيم البوليميراز Pymease مقاوم للحرارة المرتفعة، وأهمها Taq Pymease المستخلص من بكتيريا تعيش في الينابيع الحارةThems aqatis.
4-محاليل واقيه Bffes
5-شوا رد مناسبة، أهمها شاردة المغنيزيوم Mg+2 التي تعتبر عامل متمم fat لأنظيم البوليمراز.
تتألف تقنية P من ثلاث مراحل في دورة واحدة:
• مرحلة التمسخ الحراري Thema denatatin لجزيءDNA الهدف، أي فصل الطاق المزدوج
ds-DNA إلى طاقين منفصلين ss-DNA. وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 94 م .
• مرحلة تشفع البادئات Pimes anneaing، أي ارتباط كلا البادئتين مع الطاقين المنفصلين عند درجة حرارة 55م
• تطاول البادئات المتشفعة Anneaed pimes extensin بمساعدة أنظم البوليمراز وذلك بإضافة dNTPs ابتداء من البادئة وفي الاتجاه 3← 5، وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 72 م.
يمكن تطبيق تقنية P على الحمض النوويNA بإجراء خطوه أولية وهي تكوين نسخة متممة من
mpementayDNA(DNA)DNA
بواسطه انظيم الترنسكريتباز العكوسevese tansiptase، ليخضعDNA بعدها لمراحل التتضخيم السابقة.
وتعرف هذه التقنيةT-P
تستخدم تقنية ال P في مجالات عديدة منها الكشف المباشر للعامل الخمجي الممرض (جرثومي – فيروسي – طفيلي... ) قبل ارتكاس الجهاز المناعي لهذا العامل (إنتاج الأضداد). في الماضي، يتم الكشف عن العامل الممرض بشكل غير مباشر عن طريق كشف معايرة الأضداد:
- إيجابية كاذبة ← أضداد غير نوعية
- سلبية كاذبة ← تأخر ظهور إنتاج الأضداد لأسباب مناعية.
وبشكل مباشر عن طريق الزرع ← صعوبة زرع الفيروسات
طول فترة الزرع كمال هي الحال في عصيات السل
-تحديد الأنماط الجينية Gentyping للفيروس الكبدي
- الأمراض الوراثية– الكشف عنها قبل ظهور الأعراض والعلامات
– الكشف عنها عند الجنين أثناء الحمل، أو في حديثي الولادة
- تشخيص الأمراض السرطانية بالكشف الجيني للتوضع الغير طبيعي للأسس الآزوتية للجينات الورميه ngenes
-تعيين الأنماط النسيجية HA- tiss typing في مجال زراعة الأعضاء
- تلعب تقنية P دوراً هاماً في الطب الجنائي والشرعي.
1-البادئات Pimes وهي عبارة عن نيوكلوتيدات قليلة( ignetides (18 – 20 أساس آزوتي قادرة على الارتباط مع الأسس الآزوتية للحمض النووي المراد تضخيمه، وذلك في منطقة ذات ترتيب مميز ونوعي غير متبدل للأسس الازوتية في الحمض النووي أو ما يعرف بمنطقة عالية الحفظ Highy nseved egin .
2- كميات وافرة من النيوكليوزيدات ثلاثية الفوسفات منقوصة الأوكسجين
(dATP,dTP,dGTP,dTTP)Dexyneside tiphsphates(dNTPs)
3-أنظيم البوليميراز Pymease مقاوم للحرارة المرتفعة، وأهمها Taq Pymease المستخلص من بكتيريا تعيش في الينابيع الحارةThems aqatis.
4-محاليل واقيه Bffes
5-شوا رد مناسبة، أهمها شاردة المغنيزيوم Mg+2 التي تعتبر عامل متمم fat لأنظيم البوليمراز.
تتألف تقنية P من ثلاث مراحل في دورة واحدة:
• مرحلة التمسخ الحراري Thema denatatin لجزيءDNA الهدف، أي فصل الطاق المزدوج
ds-DNA إلى طاقين منفصلين ss-DNA. وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 94 م .
• مرحلة تشفع البادئات Pimes anneaing، أي ارتباط كلا البادئتين مع الطاقين المنفصلين عند درجة حرارة 55م
• تطاول البادئات المتشفعة Anneaed pimes extensin بمساعدة أنظم البوليمراز وذلك بإضافة dNTPs ابتداء من البادئة وفي الاتجاه 3← 5، وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 72 م.
يمكن تطبيق تقنية P على الحمض النوويNA بإجراء خطوه أولية وهي تكوين نسخة متممة من
mpementayDNA(DNA)DNA
بواسطه انظيم الترنسكريتباز العكوسevese tansiptase، ليخضعDNA بعدها لمراحل التتضخيم السابقة.
وتعرف هذه التقنيةT-P
تستخدم تقنية ال P في مجالات عديدة منها الكشف المباشر للعامل الخمجي الممرض (جرثومي – فيروسي – طفيلي... ) قبل ارتكاس الجهاز المناعي لهذا العامل (إنتاج الأضداد). في الماضي، يتم الكشف عن العامل الممرض بشكل غير مباشر عن طريق كشف معايرة الأضداد:
- إيجابية كاذبة ← أضداد غير نوعية
- سلبية كاذبة ← تأخر ظهور إنتاج الأضداد لأسباب مناعية.
وبشكل مباشر عن طريق الزرع ← صعوبة زرع الفيروسات
طول فترة الزرع كمال هي الحال في عصيات السل
-تحديد الأنماط الجينية Gentyping للفيروس الكبدي
- الأمراض الوراثية– الكشف عنها قبل ظهور الأعراض والعلامات
– الكشف عنها عند الجنين أثناء الحمل، أو في حديثي الولادة
- تشخيص الأمراض السرطانية بالكشف الجيني للتوضع الغير طبيعي للأسس الآزوتية للجينات الورميه ngenes
-تعيين الأنماط النسيجية HA- tiss typing في مجال زراعة الأعضاء
- تلعب تقنية P دوراً هاماً في الطب الجنائي والشرعي.