زائر
اليوم راح ابدا بالكتبة عن اول نوع من الزراعه وهي زراعة البول ..
شروط جمع عينة البول للزراعه :
1- على المريض الامتناع عن تناول المضادات الحيويه لفترة 4-5 ايام قبل اعطاء العينة لتجنب النتائج السلبية الخاطئه .
2- جمع البول في عبوه معقمه ومحكمة الاغلاق .
تنبيه المريض لعدم فتح العبوه لفترة زمنيه طويله وعدم ملامسة الجوانب الداخلية للعبوه وغلاقها مباشرة بعد وضع العينه .
- يتم جمع البول من المريض بعدة طرق اكثرها شيوعا هي ( تقنية البول الوسطى ) لسهولتها ولانها تقلل تلوث العينه بالبكتريا الموجوده ( وتتلخص بطرح الكمية الاولى من البول خارجا ثم وضع الكمية التالية وسط البول MS في عبوة الجمع وطرح اخر البول )
زراعة البول :
تستخدم لتحديد النوع البكتيري المسبب للالتهاب ... ويفضل قبل البدء بالزراعه الاخذ بالاتي :
1- اعداد الاوساط اللزمه والمناسبه للبكتريا المتوقع وجودها في العينه .
2- توفير جو معقم للقيام بعملية الزراعه .
3- يجب زراعة البول في جو لاهوائي Anaebi وذلك لوجود الساكن الطبيعي اللاهوائي Anaebi Nma Fa في الاحليل والمناطق المحيطه به .
الاوساط الزراعيه :
تزرع عينة البول غالبا على نوعين :
1- وسط الدم Bd Aga وهو وسط غني وملائم لنو معظم انواع البكتريا الموجبه والسالبه .
2- اوساط اختياريه مفرقه مثل EMB و Mankey Aga وهي اوساط ملائمه لنمو البكتريا السالبه لصبغة غرام ةتعطي دلاله لونيه على البكتريا القادره على تخمر اللاكتوز .
طريقة الزراعة بالتخطيط المباشر :
وهذي تعتبر افضل طريقه ... وتتم كالتالي :
1- اخذ العينه المراد زراعتها ونشرها على الطبق على شكل خطوط مستقيمه 3-4 خطوط بواسطة wie p .
2- حرق ال wie p بواسطة اللهب اذا كان العد ليس الهدف , ثم تبريده .
3- فرد او نشر جزء من نهاية الخطوط السابقه بخطوط مقاطعه للخطوط الاولى .
4- حرق ال wie p مره اخرى وتكرار العمليه .
5- حضن الاطباق على درجة حراره 37 م لمدة 24 ساعه في ظروف هوائيه .
6- مراقبة النمو فان لم يظهر النمو خلال 24 ساعه تترك الاطباق ليوم اخر 48 ساعه وعند بقاء الوضع كماهو في عدم ظهور النمو تسجل النتيجه :
N Gwth Afte 48 Hs
تهف الطريقه الى : الحصول على مستعمرات منفرده , حيث تعتبر طريقه من طرق التخفيف
تلوين البكتريا بصبغة غرام وتشخيصها مجهريا :
تهدف طريقة غرام الى :
1- معرفة تفاعل البكتريا مع صبغة غرام
2- معرفة شكل الخلايا البكتيريه
3- معرفة ترتيب هذه الخلايا مع بعضها
طريقة جرام في الصبغ
1- جهز شريحة زجاجيه نظيفه وضع نقطه من المحلول الملحي Nma Saine على وسط الشريحه
2- بواسطة ال wie p خذ كمية قليله جدا من النمو البكتيري وامزجها مع المحلول الملحي على سطح الشريحه
3- تجفف ال Smea بالهواء ويمرر فوق اللهب 3 مرات للتثبيت
4- تغمر الشريحه بصبغة جرام ysa Viet لمدة دقيقه
5- تغسل الشريحه بماء الحنفيه الهادىء , ثم تغمر بمحلول اليود Idine لمدة دقيقه
6- تغسل الشريحه وتغمر في الكحول مع الاسيتون لمدة 10 - 15 ثانية فقط
7- تغسل الشؤيحه جيدا بالماء الهادىء وتغمر بالصبغه البديله Safanin ولمدة دقيقه
8- تغسل الشريحه جيدا وتجفف جيدا , ثم تفحص
النتيجه :
اذا تقبلت البكتيريا صبغة جرام _______ موجبه لصبغة جرام
( لون بنفسجي )
لم تتقبل صبغة جرام ___________ سالبه لصبغة جرام
( لون احمر )
فيمايلي مخطط توضيحي لتشخيص البكتريا المسببه لالتهاب المسالك البوليه :
( عينة البول )
الزراعه على Bd Aga+ Ma Aga
1- النمو فقط على وسط Bd Aga
عند صبغها بصبغة غرام _________ بكتريا موجبه لصبغة غرام
1- كرويه ( i )
2- عصويه ( Baii )
وبفحصها ب ataase __________
+ ( Staphys )
- ( Stepts )
2- النمو على كلا الوسطين :
عند صبغها بصبغة غرام __________ بكتريا سالبه لصبغة غرام
1- كرويه مزدوجه
فحص xidase ______ +
Neisseia
Matse ________ + N.meningitidis
N. gnheae - ________
2- بكتريا عصويه
تخمير اللاكتوز ______ +
Entebate- E . i - Kebsia - itbate
________ -
Samnea - Shigea - Ptes - Psedmnas
شروط جمع عينة البول للزراعه :
1- على المريض الامتناع عن تناول المضادات الحيويه لفترة 4-5 ايام قبل اعطاء العينة لتجنب النتائج السلبية الخاطئه .
2- جمع البول في عبوه معقمه ومحكمة الاغلاق .
تنبيه المريض لعدم فتح العبوه لفترة زمنيه طويله وعدم ملامسة الجوانب الداخلية للعبوه وغلاقها مباشرة بعد وضع العينه .
- يتم جمع البول من المريض بعدة طرق اكثرها شيوعا هي ( تقنية البول الوسطى ) لسهولتها ولانها تقلل تلوث العينه بالبكتريا الموجوده ( وتتلخص بطرح الكمية الاولى من البول خارجا ثم وضع الكمية التالية وسط البول MS في عبوة الجمع وطرح اخر البول )
زراعة البول :
تستخدم لتحديد النوع البكتيري المسبب للالتهاب ... ويفضل قبل البدء بالزراعه الاخذ بالاتي :
1- اعداد الاوساط اللزمه والمناسبه للبكتريا المتوقع وجودها في العينه .
2- توفير جو معقم للقيام بعملية الزراعه .
3- يجب زراعة البول في جو لاهوائي Anaebi وذلك لوجود الساكن الطبيعي اللاهوائي Anaebi Nma Fa في الاحليل والمناطق المحيطه به .
الاوساط الزراعيه :
تزرع عينة البول غالبا على نوعين :
1- وسط الدم Bd Aga وهو وسط غني وملائم لنو معظم انواع البكتريا الموجبه والسالبه .
2- اوساط اختياريه مفرقه مثل EMB و Mankey Aga وهي اوساط ملائمه لنمو البكتريا السالبه لصبغة غرام ةتعطي دلاله لونيه على البكتريا القادره على تخمر اللاكتوز .
طريقة الزراعة بالتخطيط المباشر :
وهذي تعتبر افضل طريقه ... وتتم كالتالي :
1- اخذ العينه المراد زراعتها ونشرها على الطبق على شكل خطوط مستقيمه 3-4 خطوط بواسطة wie p .
2- حرق ال wie p بواسطة اللهب اذا كان العد ليس الهدف , ثم تبريده .
3- فرد او نشر جزء من نهاية الخطوط السابقه بخطوط مقاطعه للخطوط الاولى .
4- حرق ال wie p مره اخرى وتكرار العمليه .
5- حضن الاطباق على درجة حراره 37 م لمدة 24 ساعه في ظروف هوائيه .
6- مراقبة النمو فان لم يظهر النمو خلال 24 ساعه تترك الاطباق ليوم اخر 48 ساعه وعند بقاء الوضع كماهو في عدم ظهور النمو تسجل النتيجه :
N Gwth Afte 48 Hs
تهف الطريقه الى : الحصول على مستعمرات منفرده , حيث تعتبر طريقه من طرق التخفيف
تلوين البكتريا بصبغة غرام وتشخيصها مجهريا :
تهدف طريقة غرام الى :
1- معرفة تفاعل البكتريا مع صبغة غرام
2- معرفة شكل الخلايا البكتيريه
3- معرفة ترتيب هذه الخلايا مع بعضها
طريقة جرام في الصبغ
1- جهز شريحة زجاجيه نظيفه وضع نقطه من المحلول الملحي Nma Saine على وسط الشريحه
2- بواسطة ال wie p خذ كمية قليله جدا من النمو البكتيري وامزجها مع المحلول الملحي على سطح الشريحه
3- تجفف ال Smea بالهواء ويمرر فوق اللهب 3 مرات للتثبيت
4- تغمر الشريحه بصبغة جرام ysa Viet لمدة دقيقه
5- تغسل الشريحه بماء الحنفيه الهادىء , ثم تغمر بمحلول اليود Idine لمدة دقيقه
6- تغسل الشريحه وتغمر في الكحول مع الاسيتون لمدة 10 - 15 ثانية فقط
7- تغسل الشؤيحه جيدا بالماء الهادىء وتغمر بالصبغه البديله Safanin ولمدة دقيقه
8- تغسل الشريحه جيدا وتجفف جيدا , ثم تفحص
النتيجه :
اذا تقبلت البكتيريا صبغة جرام _______ موجبه لصبغة جرام
( لون بنفسجي )
لم تتقبل صبغة جرام ___________ سالبه لصبغة جرام
( لون احمر )
فيمايلي مخطط توضيحي لتشخيص البكتريا المسببه لالتهاب المسالك البوليه :
( عينة البول )
الزراعه على Bd Aga+ Ma Aga
1- النمو فقط على وسط Bd Aga
عند صبغها بصبغة غرام _________ بكتريا موجبه لصبغة غرام
1- كرويه ( i )
2- عصويه ( Baii )
وبفحصها ب ataase __________
+ ( Staphys )
- ( Stepts )
2- النمو على كلا الوسطين :
عند صبغها بصبغة غرام __________ بكتريا سالبه لصبغة غرام
1- كرويه مزدوجه
فحص xidase ______ +
Neisseia
Matse ________ + N.meningitidis
N. gnheae - ________
2- بكتريا عصويه
تخمير اللاكتوز ______ +
Entebate- E . i - Kebsia - itbate
________ -
Samnea - Shigea - Ptes - Psedmnas