زائر
راح اشرح المرحلة الثانية بالتفصيل بناء على طلب بعض الاعضاء ...
المرحلة الثانية : الكشف عن جزيئات خاصة بالكائن المسبب للمرض
1- الكشف عن انتجينات البكتريا :
وتتميز الطرق التالية بالسرعه والدقه والسهوله اكثر من الطرق التالقيه المناعيه السابقه ... وهي :
1- طرق الفحص المناعي الانزيمي ( EIA ) :
ومعظمها تستخدم اجسام مضاده مرتيطه مع سطح صلب ( مثل الاغشية والاطباق الرقيقة ) لاجراء التجربه من اجل الارتباط بالانتجين ( Ag ) في العينات السائله اذ انه بعد ارتباط الانتجين بالاجسام المضاده الموجوده والمحضرة يتم اضافة اجسام مضاده معلمه بالانزيمات متخصصه الى المزيج , ثم يتم اضافة الماده الاساس الخاصه بالانزيم من اجل اعطاء تفاعل مرئي نتيجه لذلك , الذي يمكن مشاهدته باجهزة خاصه .
وتكون هذه العملية ناجحه في حال كون الجسم المضاد المحضر اصلا خاص بالانتجين المضاف والذي يرتبط معه ولايتم ازالته بعمليات الغسيل المستمر .
بينما اذا كان الانتجين المضاف من نوع مغاير للجسم المضاد فان الانتجين لايلتصق بالجسم المضاد , وبالتالي يتم ازالته بعمليات الغسيل , وتكون النتيجه في هذه الجاله سلبيه ( Negative) .
ويمكن من خلال هذه الطريقه الكشف عن العديد من الجراثيم في العينات المباشره , فمثلا يمكن الكشف عن بكتريا ( Stepta Phayngitis ) في مسحة swab مأخوذه من الحلق خلال 5 - 10 دقائق وتصل دقة وحساسية هذا الفحص الى 95 % في مجمل الحالات .. كذلك يمكن الكشف عن الكلاميديا وسموم بكتريا stidim Diffiie والعديد من الفيروسات حيث يمكن الحصول على النتيجه خلال 10 دقائق الى 3 ساعات من بدء التجربه .
التجربه :
1- الكشف المباشر عن الانتيجينات بطريقة EISA .
1- اضافة العينه ( مصل الدم ) الى اجسام مضاده خاصه ملتصقه بسطح صلب .
2- اضافة اجسام مضاده معلمة بالانزيمات متخصصة بالانتجين المراد الكشف عنه .
3- اضافة الماده الاساس Sbstate لينتج التفاعل اللوني .
2- الكشف عن الاجسام المضاده ( IgM ) بطريقة EISA .
1- اجسام مضاده خاصه بالنوع ( IgM )ملتصقه بسطح صلب .
2- اضافة العينة المحتوية على IgM .
3- اضافة الانتيجينات الخاصه بهذا الجسم المضاد .
4و5- كما في الخطوات 2 و 3 من الكشف المباشر .
2- طريقة التخثر :
وتتلخص بتحضير جزيئات كبيرة atex مغطاه باجسام مضاده خاصه بنوع معين من الانتجينات , ثم خلطها مع العينه المحتويه على الانتجين وعند وجود الانتجين الخاص بالاجسام المضاده المحضره فان النتيجه الايجابيه ( Psitive ) تكون على شكل تخثر وتجمع للمزيج على شكل حبيبات صغيره .
اذ تكون المنطقه (F ) من الجسم المضاد IgG هي المربوطه مع الجزيئات الكبيره او مع بروتين A لبكتريا Staphys Aes بينما تكون المنطقه (Fab ) حره قادره على الارتباط مع النوع الخاص بها من الانتجينات .
ومن الامثله المهمه على هذا النوع التقنيه الطقم ( kit ) المحضر الجاهز لتشخيص التهاب السحايا البكتيري حيث يحتوي على 5 عبوات كل واحده تحتوي اجسام مضاده خاصه بواحده من الخمسه انواع الشائعه للبكتريا المسببه للسحايا بحيث تكون الاجسام المضاده ملتصقه على جزيئات atex ويتم التفاعل بخلط نقطه واحده من السائل النخاعي الشوكي SF مع نقطه من كل عبوه ويكون حدوث التخثر بعد التحريك دليلا على وجود انتجين البكتريا في SF .
وتستخدم هذه التقنيه في كثير من الفحوصات مثل P وفحص الروماتيزم A - F وفحص AST وغيرها من فحوصات التخثر .
المرحلة الثانية : الكشف عن جزيئات خاصة بالكائن المسبب للمرض
1- الكشف عن انتجينات البكتريا :
وتتميز الطرق التالية بالسرعه والدقه والسهوله اكثر من الطرق التالقيه المناعيه السابقه ... وهي :
1- طرق الفحص المناعي الانزيمي ( EIA ) :
ومعظمها تستخدم اجسام مضاده مرتيطه مع سطح صلب ( مثل الاغشية والاطباق الرقيقة ) لاجراء التجربه من اجل الارتباط بالانتجين ( Ag ) في العينات السائله اذ انه بعد ارتباط الانتجين بالاجسام المضاده الموجوده والمحضرة يتم اضافة اجسام مضاده معلمه بالانزيمات متخصصه الى المزيج , ثم يتم اضافة الماده الاساس الخاصه بالانزيم من اجل اعطاء تفاعل مرئي نتيجه لذلك , الذي يمكن مشاهدته باجهزة خاصه .
وتكون هذه العملية ناجحه في حال كون الجسم المضاد المحضر اصلا خاص بالانتجين المضاف والذي يرتبط معه ولايتم ازالته بعمليات الغسيل المستمر .
بينما اذا كان الانتجين المضاف من نوع مغاير للجسم المضاد فان الانتجين لايلتصق بالجسم المضاد , وبالتالي يتم ازالته بعمليات الغسيل , وتكون النتيجه في هذه الجاله سلبيه ( Negative) .
ويمكن من خلال هذه الطريقه الكشف عن العديد من الجراثيم في العينات المباشره , فمثلا يمكن الكشف عن بكتريا ( Stepta Phayngitis ) في مسحة swab مأخوذه من الحلق خلال 5 - 10 دقائق وتصل دقة وحساسية هذا الفحص الى 95 % في مجمل الحالات .. كذلك يمكن الكشف عن الكلاميديا وسموم بكتريا stidim Diffiie والعديد من الفيروسات حيث يمكن الحصول على النتيجه خلال 10 دقائق الى 3 ساعات من بدء التجربه .
التجربه :
1- الكشف المباشر عن الانتيجينات بطريقة EISA .
1- اضافة العينه ( مصل الدم ) الى اجسام مضاده خاصه ملتصقه بسطح صلب .
2- اضافة اجسام مضاده معلمة بالانزيمات متخصصة بالانتجين المراد الكشف عنه .
3- اضافة الماده الاساس Sbstate لينتج التفاعل اللوني .
2- الكشف عن الاجسام المضاده ( IgM ) بطريقة EISA .
1- اجسام مضاده خاصه بالنوع ( IgM )ملتصقه بسطح صلب .
2- اضافة العينة المحتوية على IgM .
3- اضافة الانتيجينات الخاصه بهذا الجسم المضاد .
4و5- كما في الخطوات 2 و 3 من الكشف المباشر .
2- طريقة التخثر :
وتتلخص بتحضير جزيئات كبيرة atex مغطاه باجسام مضاده خاصه بنوع معين من الانتجينات , ثم خلطها مع العينه المحتويه على الانتجين وعند وجود الانتجين الخاص بالاجسام المضاده المحضره فان النتيجه الايجابيه ( Psitive ) تكون على شكل تخثر وتجمع للمزيج على شكل حبيبات صغيره .
اذ تكون المنطقه (F ) من الجسم المضاد IgG هي المربوطه مع الجزيئات الكبيره او مع بروتين A لبكتريا Staphys Aes بينما تكون المنطقه (Fab ) حره قادره على الارتباط مع النوع الخاص بها من الانتجينات .
ومن الامثله المهمه على هذا النوع التقنيه الطقم ( kit ) المحضر الجاهز لتشخيص التهاب السحايا البكتيري حيث يحتوي على 5 عبوات كل واحده تحتوي اجسام مضاده خاصه بواحده من الخمسه انواع الشائعه للبكتريا المسببه للسحايا بحيث تكون الاجسام المضاده ملتصقه على جزيئات atex ويتم التفاعل بخلط نقطه واحده من السائل النخاعي الشوكي SF مع نقطه من كل عبوه ويكون حدوث التخثر بعد التحريك دليلا على وجود انتجين البكتريا في SF .
وتستخدم هذه التقنيه في كثير من الفحوصات مثل P وفحص الروماتيزم A - F وفحص AST وغيرها من فحوصات التخثر .
